冠亚官方在线入口和数明(míng)小讲堂 | 新冠核酸检测之PCR技术
疫情(qíng)防控
科学防疫 冠亚官方在线入口和数明有(yǒu)“芯”
当(dāng)前上(shàng)海正处于抗新型冠状病(bìng)毒肺炎疫情防控的关键阶段,在这个没有硝烟的(de)战场上,及(jí)时快速地筛(shāi)查(chá)新冠感染者并及时进行隔离是阻止新冠病毒肆(sì)意蔓(màn)延的(de)最(zuì)有效且唯一的手(shǒu)段。核酸(suān)检测是目前筛查(chá)新(xīn)冠感染者最精准、有效、低成本的(de)技术方式。
什么是PCR?
聚合酶(méi)链式反应(Polymerase Chain Reaction), 简称PCR, 又称多聚酶(méi)链式反应,是一项(xiàng)利用DNA双(shuāng)链复制的原理,在生物体外复制特定DNA片段的核(hé)酸合(hé)成技术。透过这项技(jì)术(shù),可在短时(shí)间内大量扩增(zēng)目的基因,而不必(bì)依赖大肠杆(gǎn)菌或酵母菌(jun1)等生物体。
PCR扩增的三个基本步骤
(1)变(biàn)性(xìng):模板DNA经加热至94℃左右并保(bǎo)持一定(dìng)时间(jiān)后,基于DNA半保留复(fù)制原理,还有碱基互补配对原则,即复制的过程中双(shuāng)链DNA会解链(liàn),由双链变成单链,为下(xià)轮反应做准备;
(2)退(tuì)火:模板DNA经加热变性(xìng)成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补(bǔ)序(xù)列配对结合;
(3)延伸(shēn):温度再(zài)升(shēng)至72℃左右,在DNA聚(jù)合酶的作用下,把(bǎ)游离的(de)dNTP按照碱基互补配对原(yuán)则结合到单链上(shàng),形成一条由旧链和新链杂合成的新的双链DNA。
PCR扩增原理:变(biàn)形(xíng)-退火-延(yán)伸温(wēn)度(dù)循环
理论上,经过上面步骤(zhòu),目(mù)标DNA浓度可增加一倍。重(chóng)复(fù)循环上述(shù)过(guò)程,可获得更多的“半保留(liú)复制链”,而形成的(de)新(xīn)链又可成为下次循环的模板。每完成(chéng)一个(gè)循环需(xū)2~4分钟, 仅需(xū)2~3小时就能(néng)将目标DNA扩增(zēng)放大(dà)几百万(wàn)倍。
全自动核酸(suān)提(tí)纯及实时荧光PCR分(fèn)析系统
经过以上分(fèn)析(xī),我们就可(kě)以理解(jiě)为(wéi)什么核酸检测结果最快(kuài)能在几个小时内出(chū)结果。
实时荧光PCR定量分析(xī)
PCR扩增仪温度控制指标主要有(yǒu):温度的准确性、均匀性(xìng)、以(yǐ)及升降(jiàng)温速度。
1. 温(wēn)度的准(zhǔn)确性:是指样品孔(kǒng)温度(dù)与设定温度(dù)的(de)一致性,它直接关系到实验的成败。因而对PCR扩增仪(yí)而言温度控制就意味着产(chǎn)品质量。
2. 温度(dù)的均(jun1)匀性:是指样(yàng)品孔间的(de)温(wēn)度差异,它关系(xì)到在不同样品(pǐn)孔(kǒng)进行反(fǎn)应结果的(de)一致性。
3. 升降温速度:更快(kuài)的升(shēng)降温速度,可以有效缩短反(fǎn)应时间和可能的非特异性结合、反应的时间,从而提高(gāo)PCR反应特异性。
相较于传统的相(xiàng)对稳定(dìng)耐用的机械式,新的半导体温控技(jì)术——TEC温度控制技术具有(yǒu)升降温更快速的优势,已经成为PCR扩增(zēng)仪的首选温(wēn)度控制(zhì)技术。
半导体制冷器 (Thermo Electric Cooler,简称 TEC) 是利用半导体材料(liào)的(de)帕尔(ěr)贴效应制成的。如图下(xià)所示,帕尔帖效应是指当直(zhí)流电流通过(guò)两种半导体材料组成的电偶时,其一端吸热,一(yī)端(duān)放热的现象。TEC 包括一(yī)些 P 型和 N 型对(组),它们通过电极连在一(yī)起,并(bìng)且夹在两个陶瓷电极之间,当有电(diàn)流从 TEC 流过时,电流产生(shēng)的热量会从 TEC 的 一侧(cè)传到另一(yī)侧,在 TEC 上产生″热(rè)″侧和″冷″侧,这就是 TEC 的加热与致冷原理。
帕尔帖效应,PN 节以及热(rè)流动示意图(tú)
PCR扩增(zēng)仪一般具有两种温控(kòng)模式,即模块温控(kòng)模(mó)式(shì)(Block-control)和反应管温控模式(tube-control)。管内样(yàng)品的温(wēn)度无(wú)法与温控(kòng)模(mó)块同时达到(dào)预设温度(dù),特别(bié)是PCR反(fǎn)应(yīng)中的孵育过程一般为(wéi)30秒(miǎo)或(huò)更短,如果采用只有模块温控模式(shì)的(de)话,反应混合物孵育的(de)时间与程序设定的时间会有相当大的差距。为了达到反应管内部温度精确控(kòng)制,需采用反应管控(kòng)制模(mó)模式,通过温度控制算(suàn)法进行参(cān)数标定(dìng)和补偿(cháng),确保反应混合物按(àn)照程序设定的时间维持预(yù)设温度。
科技战“疫”,冠亚官方在线入口和数明在行动(dòng)
面对近期香港、深圳(zhèn)、上海(hǎi)等地奥密(mì)克戎的快速扩散,核酸(suān)检测能力在数量和(hé)速度方面都(dōu)面(miàn)临(lín)着极大(dà)的考(kǎo)验。冠亚官方在线入口和数明半导体积极(jí)发(fā)挥了科技技术方(fāng)面的优势,组织技术专家研(yán)究PCR扩增技术(shù)的优化解决方案(àn),以功(gōng)率器件门(mén)极驱动芯片和TEC控制器为(wéi)着力点,优先保障芯片供(gòng)应和交付(fù),与客(kè)户(hù)一起助力抗疫,共克(kè)时艰。
冠亚官方在线入口和数明(míng)半导体自研的20V-600V耐压全系列的(de)低边、半桥、三相半桥等功率管门极驱动(dòng)芯片(SLM2103S、SLM2136等)可用于驱动(dòng)TEC,协助PCR扩增仪器客(kè)户快速(sù)、方便地完成系统设计,在当前半导(dǎo)体供应短缺时期,可以满(mǎn)足客户设计方案的快速变更、验证与量产。
600V耐压半桥功率器(qì)件驱(qū)动芯片(piàn)工作(zuò)示意图
600V耐压(yā)三相半桥功率器件(jiàn)驱动芯片工(gōng)作(zuò)示意图
冠亚官方在线入口和数明半导(dǎo)体的单芯片TEC控制器产品——SLM8833/8834/8835 集成了TEC驱动电路、低(dī)温(wēn)飘高精(jīng)度温度误差放大器及环路补偿电(diàn)路、温度设定与传感电路,采用高效(xiào)的(de)单(dān)电感架构(gòu),实(shí)现更紧凑、更高(gāo)的转换效率及(jí)更低(dī)的噪声;其中功率(lǜ)级集成了超(chāo)低阻抗的MOSFET,损耗更低寿命(mìng)更久;同时匹配模拟PID与数字PID两种温控模式(shì),以(yǐ)满足客户PCR扩增仪的小型化创新设计需求。
由(yóu)SLM8834 构成的 TEC 系统(tǒng)框图(tú)
模拟PID温控器模式(shì)
数字PID温(wēn)控(kòng)模式